一、细胞概述
RAW264.7中文全名为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,来源于雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤,是常用的炎症细胞模型之一,常见于研究细胞吞噬、细胞免疫、分子免疫学。
RAW264.7是一种单核细胞/巨噬细胞系,具有松散贴壁的立方形或纺锤形细胞和圆形活细胞。细胞松散附着、堆积并变圆是正常的,尤其是在培养密集时。活细胞可以分离和漂浮,特别是当培养物变得更加融合时。这些未附着的细胞仍然有活力,应通过温和离心保留下来,然后重新加入烧瓶中。不同批次血清的细微差异会导致RAW264.7细胞或多或少的附着。我们使用未经热灭活的优质血清,因为热灭活可以减少附着因子和生长因子。
二、细胞培养条件
1)来源:鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;单核细胞;巨噬细胞
2)形态:不规则圆形,纺锤状,贴壁细胞,少量悬浮。
3)含量:>1x106细胞数
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5)用途:仅供科研使用。
三、细胞培养建议
1、细胞复苏:将含有1m细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5ml培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心3min,弃去上清液,补加4-6ml完全培养基吹匀。然后将细胞悬液加入培养瓶中过夜,第二天检查细胞密度并换液。
2、细胞传代:当细胞密度达到80%-90%,即可进行传代培养。
2.1弃去培养液上清,用不含钙、镁离子的PBS(BC-BPBS-01)润洗细胞2次。
2.2加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-EDTA)BC-CE-005于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,镜下观察细胞大部分圆缩并脱落,肉眼观察细胞培养瓶上部细胞呈挂线状滑落,迅速拿回操作台,于手心轻敲几下培养瓶,可见细胞呈沙粒状滑落,加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
2.3轻轻吹打细胞,完全脱落分散后吸出,在1000RPM条件下离心3min,弃去上清液,补加1-2ml吹匀。
2.4按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞重悬按1:2到1:4的比例分到新的培养瓶中。
3、细胞冻存
冻存条件:20%FBS的培养基+10%DMSO(或使用细胞冻存液BC-CFM-01),2-8℃放置2小时,再将冻存管置于梯度降温冻存盒并放于-80度过夜,第二天转入液氮罐;